Taq Plus DNA聚合酶
Cat. #：P1031，P1032，P1033，P1034
產品簡介
Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶與Pfu DNA聚合酶的獨特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍，擴增片段的長度可達20 kb（簡單模板）。在擴增復雜模板（如GC-rich或重復序列）時，Taq Plus DNA聚合酶的擴增效率高于Taq DNA聚合酶，可用于復雜模板的PCR擴增。延伸速度為20s/kb（70~75℃，簡單模板可達5s/kb）。擴增產物具有兩種末端：平末端與3'-dA。
產品組成
Component | P1031 250U | P1032 250U | P1033 1,000U | P1034 1,000U |
Taq Plus DNA聚合酶（5U/μl）[1] | 50 μl | 50 μl | 200 μl | 200 μl |
Taq Plus DNA聚合酶（2.5U/μl）[1] | 100 μl | 100 μl | 400 μl | 400 μl |
10× Tpol Buffer（Mg2+ Plus）[1] | 1.25 ml | 1.25 ml | 1.25 ml × 4 | 1.25 ml × 4 |
6× Loading Buffer[2] | 1 ml | 1 ml | 1 ml | 1 ml |
dNTPs（2.5mM）[3] | - | 1 ml | - | 1 ml × 4 |
[1] 提供5U/μl和2.5U/μl兩種活性單位的包裝可供選擇，如無特別說明默認5U/μl。
[2] 10× Tpol Buffer分為Mg2+ Plus與Mg2+ Free兩種包裝，可方便選擇。如無特別說明提供10× Tpol Buffer（Mg2+ Plus）。Mg2+ Free的10× Tpol Buffer提供25 mM MgSO4。提供5U/μl和2.5U/μl兩種活性單位的包裝可供選擇，如無特別說明默認5U/μl。
[3] 6× Loading Buffer，如有需要可單獨購買（Cat. #：M9041）。
[4] dNTPs是dATP、dGTP、dCTP和dTTP等摩爾混合物，P1011/P1013不含dNTPs，如有需要請單獨購買（Cat. #： P9011/P9012/P9013）。
活性定義
一個活性單位（U）指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在72℃、30 min內，攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
保存條件
-20℃保存2年。
質量控制
純度檢測：經質量檢測，產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。
功能檢測：PCR方法檢測無宿主殘余DNA，能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。
應用舉例
1. 配制反應體系
請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：
Ordinal | Component | Volume (50 μl reaction volume) | Final concentration (50 μl reaction volume) |
1 | 10× Tpol Buffer（Mg2+ Plus） | 5 μl | 1× |
2 | dNTPs（2.5mM） | 4 μl | 0.4 mM |
3 | upstream primer (10 μM)[1] | 2 μl | 0.4 μM |
4 | downstream primer (10 μM)[1] | 2 μl | 0.4 μM |
5 | Taq Plus DNA聚合酶（5U/μl）[2] | 0.5 μl | 2.5U |
6 | template DNA[3] | 1-4 μl | <1μg |
7 | 超純水[4] | To 50 μl | - |
optional | MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[6] | Variable | - |
[1] 引物終濃度建議范圍：0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度，效率低時可提高濃度。
[2] 根據目的片段擴增的難易程度調整酶的用量。
[3] 不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建議用量如下表（50 μl反應體系）。
Template | Dosage |
人類基因組DNA | 0.1μg-1μg |
λDNA | 0.5ng-5ng |
大腸桿菌基因組DNA | 10ng-100ng |
質粒DNA | 0.1ng-10ng |
[4] 可單獨訂購超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。
[5] 可單獨訂購25mM MgCl2（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。
2. 設定反應程序進行PCR反應
Stage | Temperature | Time | Number of Cycles |
Initial Denaturation | 94℃ | 3 min | 1 |
Denaturation | 94℃ | 30 sec | 25-35 |
Annealing | 55-68℃[1] | 30 sec | |
Extension | 72℃ | Variable[2] | |
Final Extension | 72℃ | 5-10 min | 1 |
[1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。
[2] 延伸時間按20s/kb來設最佳（簡單模板可達5s/kb）。
3. 分析結果
將產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要，可進行割膠回收。
無產物或產物量少的改進措施有：1調整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分，需要高倍稀釋（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl2（Cat. #：P9031）等可提高產量。
操作注意事項
1 室溫下Taq Plus DNA聚合酶有一定的活性，為避免發生非特異性擴增，請于冰上配置反應體系，并且最后添加Taq Plus DNA聚合酶或模板DNA。
2 Taq Plus DNA聚合酶的擴增產物有兩種末端：平末端和3'-dA突出末端。如要進行TA克隆，請先進行加A反應，以提高克隆效率。（加A反應：參考如下體系，72℃，15-30min）
PCR（純化）產物 | 1-7 μl |
10× Taq Buffer（Mg2+ Plus） | 1 μl |
dATP | 0.2 mM |
Taq DNA聚合酶 | 5U |
超純水 | To 10 μl |
引物設計注意事項
引物長度一般在15-30個堿基之間；上下游引物3’末端避免互補，避免出現3個以上重復的G或C，或出現發夾結構，否則會產生非特異性擴增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量盡量接近；Tm值控制在55-65℃之間，且上下游引物Tm值盡量接近，額外附加序列（酶切位點、修飾等）是非模板匹配序列，不參與Tm值計算。
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名稱 | 貨號 | 規格 |
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